Dentro de las posibles vías de tratamiento para la DMAE se encuentra la sustitución de las células dañadas por material celular nuevo, como es el caso de las células del epitelio pigmentario de la retina. Se trata de terapia génica para el tratamiento de la DMAE seca.
Durante el Pasado I Congreso Europeo Mácula Retina, CABIMER presentó este póster con un ensayo pre clínico de terapia celular con epitelio pigmentario de la retina.
Terapia génica de sobre-expresión del gen SOD1 para el tratamiento de la DMAE seca.
INTRODUCCIÓN
A pesar de su alta prevalencia de la DMAE, hasta el momento no hay tratamientos efectivos que puedan curar o revertir los síntomas de la variedad no exudativa de esta enfermedad (DMAE seca). El estrés oxidativo contribuye con el proceso degenerativo del epitelio pigmentario de la retina (EPR) y de los fotorreceptores.
Uno de los principales sistemas anti-oxidantes de la retina lo constituye la familia de superóxido dismutasas (SOD).
Se ha demostrado que los modelos deficitarios de Sod1 (Sod1-/-) desarrollan degeneración de la retina y del EPR con presencia de drusas y neovascularización coroidea.
Esto sugiere la importancia de la presencia del gen SOD1 para evitar la degeneración retiniana.
Por tal motivo, en este estudio nos hemos propuesto determinar la seguridad y eficacia de la sobre-expresión de SOD1 a través de terapia génica in vitro y en modelos murinos de DMAE.
MATERIALES Y MÉTODOS
El ADNc del gen SOD1 humano fue clonado en el plásmido pEGFP-N1 (Fig. 1). Luego las células derivadas de EPR humano RPE-1 fueron transfectadas con esta construcción.
La expresión del transgén (SOD1) fue evaluada por inmunofluorescencia (IF) y Western blot (WB). Posteriormente, las células RPE-1 transfectadas con los plásmidos pEGFP y pEGFP-SOD1 fueron expuestas a diferentes dosis de H2O2 durante 4h.
Seguidamente, se determinó la viabilidad celular por ensayo de WST-1.
Finalmente, se ha realizado la clonación del transgén SOD1 en el plásmido especifico para la producción de virus adeno-asociados (AAV2) para realizar terapia génica en el modelo de DMAE Nrf2-/-. Estadística, one-way ANOVA, *P<0,05 **P<0,01.
RESULTADOS
Las células RPE-1 transfectadas con pEGFP-SOD1 expresaron el transgén en el núcleo y la mitocondrias, visualizadas con el marcador MitoTracker (Fig. 2).
Los niveles de expresión del transgén fueron similares al SOD1 endógeno como se muestra en el WB (Fig. 3).
La viabilidad de las células RPE-1 tratadas con H2O2 fue significativamente más alta en las células transfectadas con pEGFP-SOD1 que en el grupo control (pEGFP). El efecto protector se observo en las dosis más bajas H2O2 (Fig. 4).
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
La sobre-expresión del gen SOD1 protege la línea celular derivada de EPR humano RPE-1 del estrés oxidativo generado por la exposición al H2O2.
En la siguiente fase de este estudio de va a clonar el gen SOD1 en el vector viral AAV2 para utilizarlo en modelos de DMAE Nrf2-/-.
Financiación:
ISCIII (Miguel Servet-I, CP15/00071) y cofinanciado por el Fondo Europeo de Desarrollo Regional.
A. Montero-Sánchez1, D. Rodríguez-Martínez, M.L. Valdés-Sánchez, I. Relimpio-López, S.S. Bhattacharya, F.J. Díaz-Corrales*
Contacto autores: francisco.diaz@cabimer.es; dori.montero@cabimer.es
