DMAE-CELLS_FASE2: Estudio preclínico de seguridad y eficacia del trasplante celular de epitelio pigmentario de la retina cultivado sobre matriz de fibrina-agarosa para el tratamiento de la degeneración macular asociada a la edad

Instituciones participantes CABIMER, IATA-LARCELL, Escuela de Ingenieros, UGC Hospital Virgen Macarena.

Investigador principal: Francisco J. Díaz Corrales

Co-investigador principal: Berta de la Cerda Haynes

1: PREPARACIÓN DE MATERIAL CELULAR EN CONDICIONES GMP PARA APROBACIÓN POR  AEMPS

El PT1 se dedicará a la optimización de los protocolos de cultivo y diferenciación celular  para preparar las células RPE en condiciones de cultivo GMP que permitan la aprobación de la AEMPS. En este sentido se realizarán exhaustivos controles de seguridad y biodegradación de las células y la matriz. Asimismo se procurará la optimización de las características físico-químicas de la matriz de fibrina-agarosa para conformar el implante idóneo a criterio de los cirujanos que han de manejarlo.

Objetivos CABIMER

  1. Preparación de protocolos de diferenciación transferibles a GMP; controles de calidad estandarizados en células iPSC y RPE
  2. Controles de calidad en ratón:
    1. Evaluación de teratomas en el ojo 6 meses después de implante
    2. Control de la calidad genética de las células iPSCs; que no se hayan introducido mutaciones en oncogenes que no estuvieran en el ADN del paciente
    3. Control de homogeneidad del producto celular final de RPE diferenciado
    4. Control del tiempo de biodegradación del implante en el espacio subretiniano del animal

Objetivos LARCELL

  1. Ajuste fino de las características de resistencia y elasticidad de la matriz en cooperación con los cirujanos de HUV MACARENA.
  2. Puesta a punto de la fabricación del producto final en condiciones GMP para aprobación por AEMPS

OBJETIVOS

  • RPE procedente de iPSC con todos los controles de calidad y producido en sala GMP en condiciones compatibles con aprobación de la agencia
  • Producto final a implantar en animales grandes consistente en matriz+células con unas condiciones óptimas para cirugía

 

2: PREPARACIÓN DEL MODELO QUIRÚRGICO EN CERDOS Y PUESTA A PUNTO PRE-QUIRÚRGICA DEL IMPLANTE 

El PT2 se dedicará a la preparación de un modelo de degeneración macular en cerdos para testar posteriormente la efectividad terapéutica del implante subretiniano.  Para ello se aplicará un daño específico mediante luz láser pulsada a 532 nm que afecta de manera controlada el RPE. Se pondrá a punto el modelo con nueve animales en total, en una programación escalonada de 3 animales cada mes para permitir el estudio y ajuste de las condiciones de “fabricación y estandarización del modelo de enfermedad”.  Será necesaria la evaluación de los ojos de estos animales, por lo que se requiere equipamiento específico de oftalmología como fundoscopio y OCT. Al mismo tiempo se desarrollará la herramienta quirúrgica tipo inyector para la colocación del implante, que se testará en 3 animales. Por último se comprobará la viabilidad celular en distintas condiciones de almacenamiento y transporte del implante hasta el lugar de su aplicación en animales para tener listas las condiciones en las que se testará posteriormente la efectividad terapéutica.

OBJETIVOS 

Objetivo ESCUELA DE INGENIEROS:

  1. Preparación de un prototipo de inyector en cooperación con los cirujanos de HUV MACARENA.

Objetivo CABIMER y HUV MACARENA:

  1. Preparación de un modelo de Degeneración Macular en cerdos.

Objetivo CABIMER Y LARCELL:

  1. Evaluación de las condiciones óptimas de transporte y conservación del implante (matriz+células) previas a la cirugía

 

PRODUCTOS 

  1. Protocolo de preparación de daño en RPE en cerdos
  2. Protocolo de evaluación oftalmológica de animales tratados con láser
  3. Prototipo inyector de microcirugía
  4. Condiciones de transporte de implante para maximizar viabilidad celular
  5. Patente inyector microcirugía

 

3: EVALUACIÓN DE EFECTIVIDAD TERAPEUTICA DEL IMPLANTE SUBRETINAIANO DE MATRIZ+IPS-RPE EN EL MODELO ANIMAL DE DAÑO EN RPE EN CERDOS

El PT3 consistirá en la evaluación del la capacidad  terapéutica del implante en el espacio subretiniano de animales a los que previamente se habrá inducido un daño específico en su RPE. Se evaluará la capacidad del implante producido en las condiciones establecidas en PT1 para conservar la viabilidad de los fotorreceptores de la retina del animal así como el impacto general del implante en la salud ocular. Con los animales vivos se tomarán imágenes de fondo de ojo y se medirá el grosor de las capas de la retina por OCT, tras su sacrificio se realizará una evaluación histológica completa de seguridad y eficacia.

La estrategia general será causar daño en RPE, según protocolo establecido en PT2, transportar el implante en condiciones establecidas en PT2 y mediante cirugía colocarlo en la región periférica del daño en RPE. Se comparará la zona de retina que queda con implante respecto a la zona que queda sin implante. Se realizará visita en la semana 2 para evaluación de la correcta colocación del implante; visita a la semana 6 para evaluación de efecto terapéutico y visita a la semana 12 para evaluación y posterior sacrificio del animal y toma de muestras para estudio histológico.

Se utilizarán 12 animales de modo escalonado, en 6 cirugías programadas a lo largo del PT3.

 

OBJETIVOS 

Objetivos todos los equipos:

1. Cirugía cerdos pre-tratados con daño en RPE
2. Evaluaciones oftalmológicas periódicas
3. Evaluación final de seguridad y eficacia

 

PRODUCTOS 

  1. Protocolo de cirugía del implante
  2. Protocolo de evaluación oftalmológica de animales implantados
  3. Informe final de resultado-Publicación en revista científica.
  4. Informe AEMPS

 

DMAE-CELLS_FASE2: Estudio preclínico de seguridad y eficacia del trasplante celular de epitelio pigmentario de la retina cultivado sobre matriz de fibrina-agarosa para el tratamiento de la degeneración macular asociada a la edad.